Microscopy Fluorescence: принсипҳои усули

Азхудкунии ва аз нав партобҳои аз моеъҳои ғайриорганикӣ ва органикӣ минбаъдаи нури натиҷаи phosphorescence ё fluorescence аст. Фарқи байни зуҳуроти давомнокии фосилаи байни азхудкунии ва партофтани флюс нур аст. Вақте, ки fluorescence ин равандҳои қариб ҳамзамон сурат, дар ҳоле, phosphorescence - бо таъхир.

маълумоти таърихӣ

Дар 1852, олими Бритониё Stokes, аввал fluorescence тавсиф карда шудаанд. Ӯ мӯҳлати нав, ки дар натиҷаи он таљрибањо бо љорї fluorspar, ки дар зери нури ултрабунафш мерезед, нури сурх. Stokes қайд падидаи ҷолиб. Ин аст, нишон дод, ки дар wavelength аз радиатсионӣ хурди аст, ҳамеша бузургтар аз ҷараёни нури excitation аст.

Барои тасдиқи гипотеза дар асри 19 бисёр таҷрибаҳо вуҷуд доранд. Онҳо нишон доданд, ки як қатор намунаҳои fluoresce дар зери таъсири нури ултрабунафш. Дар байни мавод, дар байни чизҳои дигар, кристаллњо шуда, resins, маҳсулоти маъданӣ, chlorophyll, маводи мухаддир хом, пайвастагињои ғайриорганикӣ, витаминҳо, равғани. Истифодаи бевоситаи рангњои барои санҷишҳои биологӣ танҳо дар соли 1930 оғоз

microscopy Fluorescence: Шарҳи

Баъзе аз масолеҳе, ки дар нимсолаи аввали омӯзиши асри 20 хусусияти баланд намоиш. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Бо шарофати ба иҷро, ки метавонад бо усули намунаи карда намешавад ба даст ояд, усули microscopy fluorescence табдил ёфтааст воситаи муҳим дар соҳаи тадқиқоти биотиббӣ ва биологӣ. Баробари натиҷаҳои муҳим ба даст оварда ва масолеҳи шуданд.

? Яҳува чӣ имкониятҳо мекунад усули microscopy fluorescence? Бо истифода аз маводи нав имконпазир гардид ва интихоби ҳуҷайра хеле мушаххас ҷузъҳои submicroscopic. microscopy Fluorescence метавонад молекулаҳои ягонаи ошкор. Гуногун рангњои имкон медиҳад, ки муайян намудани адад гуногун дар як маротиба. Сарфи назар аз қарори фазоии маҳдуди мўҳлати diffraction таҷҳизоти, ки ин дар навбати худ, вобаста ба хусусиятҳои хоси намунаи, муайян намудани молекулаҳои поён ин сатҳ аст, низ хеле имконпазир аст. намунаҳои гуногуни баъд аз autofluorescence стенди шуоъзании. Ин падида аст, ба таври васеъ дар petrology, ботаника, саноати нимноқил истифода бурда мешавад.

хусусиятҳои

Таҳсил дар бофтаҳои ҳайвонот ва ё микроорганизмҳои аксаран мураккаб ё хеле заиф ва хеле қавӣ autofluorescence ояҳо. Бо вуҷуди ин, арзиши дар омӯзиши касб љорї намудани ҷузъҳои моддӣ дар wavelength мушаххас ба ҳаяҷон ва нӯрпошӣ шиддатнокии ҷараёни нури зарурӣ. Fluorochromes ҳамчун рангњои қодир мустақилона замима ба сохторҳои (намоён ва ё ноаён) баромад мекунанд. Ҳамин тавр онҳо доранд, интихоби баланд ба ҳадаф, ва ҳосили квантї.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. microscopy Fluorescence ҳамаҷониба ёфта, аз замони пайдоиши рангњои табиї ва синтетикї истифода бурда мешавад. Онҳо профилҳои шиддатнокии баъзе аз партобҳои ва excitation девонагон ва мақсаднок ба ҳадафҳои биологӣ махсус.

Муайян намудани молекулаҳои инфиродӣ

Аксаран, дар шароити беҳтарин, шумо метавонед як доирае унсури алоҳида қайд гирифта шавад. Барои ин, дар байни чизҳои дигар, зарур барои таъмин намудани садои кофӣ пасти детектори ва замина оптикӣ аст. молекулаи Fluorescein ба нокомӣ сабаби photobleaching метавонад то 300 ҳазор. Photons дидаед. Дар 20% самаранокии ҷамъоварии раванд ва метавонад ба онҳо дар ҳаҷми тақрибан 60 ҳазор нафар ба қайд гирифта.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. microscopy Fluorescence асоси photodiodes тармафароӣ ё зарб электронӣ, иҷозат муҳаққиқон риоя кардани рафтори молекулаҳои инфиродӣ тавассути дуюм, ва дар баъзе ҳолатҳо ҳатто дақиқа.

мураккабии

Масъалаи асосии ба фоидаи рафъ намудани замина садои оптикӣ. Аз сабаби он, ки бисёре аз масолеҳе, ки дар тарҳрезии филтрҳо ва линзаҳо намоиш баъзе autofluorescence, кӯшишҳои олимон дар марҳилаҳои аввали ба истеҳсоли ҷузъҳои дорои fluorescence паст нигаронида шуданд. Бо вуҷуди ин, таҷрибаҳои минбаъда ба хулосањои нав гардид. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Аз ҷумла, аз он пайдо шуд, ки microscopy fluorescence, дар асоси умумии инъикоси дохилӣ, он имкон медиҳад, барои ба даст овардани замина паст ва сабук excitation шиддатнокии баланд.

механизм

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Принсипҳои microscopy fluorescence, дар асоси умумии инъикоси дохилии истифодаи мавҷи бешубҳа шахсро ё бешубҳа шахсро аст. Ин дар сарҳади миёни ВАО бо гуногун рух нишондињандањои зарарро. Дар ин ҳолат, чӯбро нур ба воситаи худтаъминкунӣ мегузарад. Он дорои як параметри шохиси зарарро баланд.

Дар худтаъминкунӣ шафати ба мањлули ё шиша бо параметри кам. Агар чӯбро нур дар он дар як кунҷи он аст, ки бештар муҳим равона карда, чӯбро пурра аз интерфейси инъикос карда мешавад. Ин падида, дар навбати худ, боиси мавҷҳои nonpropagating. Ба ибораи дигар, дар соҳаи электромагнитӣ тавлид, ки борун ба миёна бо параметр шохиси зарарро камтар ба масофаи камтар аз 200 nanometers.

Мавҷи бешубҳа шахсро шиддатнокии нур мебуд, ки ба барангехтан fluorophores кифоя бошад. Бо вуҷуди ин, аз сабаби хеле хурд умқи он, ҳаҷми он хеле ночиз хоҳад буд. Дар натиҷа дар як замина сатҳи паст аст.

дигаргуншавӣ

microscopy Fluorescence аст умумии инъикоси дохилӣ дар асоси, мумкин аст бо epi-партави амалӣ мегардад. Ин талаб мекунад линзаҳо бо кушодагии ададӣ баланд (на камтар аз 1.4, балки он матлуб, ки он расидааст 1.45-1.6 аст), ва қисман дастгоҳи соҳаи мунаввар. Дар охирин аст, ки бо андозаи ҷойи хурд ба даст. Барои якрангї бузургтар истифодаи ангуштарин борик, ки аз ҷониби ки насибе аз наҳр баста. Барои кунҷи интиқодӣ, ки пас аз он аст, ки инъикоси маҷмӯъ, ба мо лозим аст, ки сатҳи баланди refraction аз миёна таъмид дар Линзаи ва он шиша Сарпӯши микроскоп.